Organ Culture:- Leaf Culture
UPDATED ON:- 01-07-2023
पर्ण संवर्धन (Leaf Culture):-
· परिभाषा (Definition):- जब प्ररोह शिखाग्र की अपरिपक्व तरुण पत्तियों को कर्तोतक के रूप में उपयोग करते हुए रासायनिक रूप से परिभाषित माध्यम पर संवर्धित किया जाता है तो इसे पर्ण संवर्धन कहते हैं।
(When immature young leaves of shoot apex are cultured on a chemically defined medium using it as an explant, it is called leaf culture.)
· सिद्धान्त (Principle):-
Ø तरुण पत्तियों को प्ररोह शिखाग्र से तोड़कर उनका सतही निर्जमीकरण किया जाता है और फिर उन्हें ठोस अगार माध्यम पर स्थापित कर दिया जाता है।
(Young leaves are broken off from shoot apex and surface sterilized and then placed on a solid agar medium.)
Ø संवर्धन में पत्तियाँ लम्बे समय तक स्वस्थ बनी रहती हैं।
(Leaves remain healthy for a long time in culture.)
Ø संवर्धन के लिए पत्तियाँ निर्जमित रूप से उगाये गए पौधों से भी ली जा सकती हैं।
(For culturing, leaves can also be taken from plants grown in sterilized conditions.)
Ø चूंकि पत्तियों में सीमित वृद्धि क्षमता होती है, इसलिए संवर्धन में पर्ण वृद्धि की मात्रा पर्ण को तोड़ने के समय पर्ण की परिपक्वता अवस्था पर निर्भर करती हैं।
(Since leaves have limited growth potential, the amount of leaf growth in culture depends on the maturity stage of the leaf at the time of breaking off the leaf.)
Ø अपरिपक्व तरुण पत्तियों में परिपक्व पत्तियों की तुलना में अधिक वृद्धि क्षमता पायी जाती है।
(Immature young leaves have higher growth potential than mature leaves.)
Ø पर्ण संवर्धन पर अधिकांश कार्य निम्न पादपों में हुआ है, विशेषकर फर्न्स जैसे ओसमंडा (Osmunda)। उच्च पादपों में पर्ण संवर्धन के लिए तम्बाकू व सूरजमुखी का उपयोग किया जाता है।
(Much of the work on leaf culture has been done in lower plants, especially ferns such as Osmunda. Tobacco and sunflower are used for leaf culture in higher plants.)
Ø फर्न्स में पर्ण संवर्धन के लिए भूमिगत कलिकाओं से 1.2 mm आकार की तरुण पर्ण आद्यक को काटा जाता है।
(For leaf culture in ferns, a 1.2 mm size young leaf primordium is cut from underground buds.)
Ø संवर्धित पर्ण आद्यक की वृद्धि साबुत पर्ण की तुलना में पहले पूर्ण हो जाती है।
(The growth of cultured leaf is completed earlier than the intact leaf.)
· विधि (Procedure):-
Ø पादप की कायिक वृद्धि अवस्था पर प्ररोह शिखाग्र से बहुत अधिक तरुण पर्ण को तोड़कर अलग कर लेते हैं।
(On the vegetative growth stage of the plant, break off young leaves from the shoot apex.)
Ø अब इन तरुण पत्तियों को बहते हुये नल के पानी में धो लेते हैं।
(Now wash these young leaves in running tap water.)
Ø अब इन तरुण पत्तियों को 10 मिनट के लिए 5℅ Teepol विलयन में डुबोकर रखते हैं। अब Teepol को हटाने के लिए कर्तोतकों को पानी से धो लेते हैं।
(Now keep these young leaves immersed in 5℅ Teepol solution for 10 minutes. Now, to remove Teepol, wash the explants with normal water.)
Ø अब इन तरुण पत्तियों के सतही निर्जमीकरण के लिए 30 सेकंड के लिए 70℅ Ethanol में डुबोकर रखते हैं।
अब इन्हे 10 – 15 मिनट के लिए 0.8℅ सोडियम हाइपोक्लोराइट के विलयन में डुबोकर रखते हैं। अब अतिरिक्त रसायनों को सतह से उतारने के लिए 3 – 4 बार निर्जमित आसुत जल से धोते हैं।
(Now for surface sterilization of these young leaves, immerse them in 70℅ Ethanol for 30 seconds. Now, immerse them in 0.8℅ sodium hypochlorite solution for 10 - 15 minutes. Now wash 3-4 times with sterilized distilled water to remove excess chemicals from the surface.)
Ø अब इन तरुण पत्तियों को संवर्धन ट्यूब में 20 ml ठोस अगार माध्यम पर स्थापित करते हैं।
(Now these young leaves are placed in a culture tube on 20 ml solid agar medium.)
Ø अब इस संवर्धन का 25°C ताप व 16 घंटे प्रकाश काल पर ऊष्मायन करते हैं। जिससे कुछ दिनों में पहले प्ररोह तंत्र व बाद में मूल तंत्र विकसित हो जाता है। अब इन पौधों को गमलों में प्रतिस्थापित कर देते हैं।
(Now incubate this culture at 25 ° C temperature and 16 hours light period. As a result, in a few days, the shoot system is developed first and then the root system develops. Now transplant these plants into pots.)
· Importance (महत्व):-
Ø पर्ण संवर्धन से पर्ण के विकास पर विभिन्न पोषक तत्वों, वृद्धि कारकों तथा परिवर्तनशील वातावरणीय दशायों के प्रभाव का अध्ययन किया जाता है।
(Effect of various nutrients, growth factors and variable environmental conditions on leaf growth are studied through leaf culture.)
Ø फर्न्स में पर्ण संवर्धन का उपयोग बीजाणुधानी के निर्माण का अध्ययन किया जाता है। कौनसे आकार पर पर्ण आद्यक पर्ण में परिवर्तित होना शुरू करती है, इसका भी अध्ययन किया जाता है।
(The leaf culture in ferns is used to study the development of sporangium. It can also be studied that at which size, the leaf primordium starts to convert into leaf.)
Ø सोलेनेसी कुल के अधिकांश पौधों की तरुण पत्तियों को जब 1 – 5 µm Kinetin या 6 – BAP या 2 – iP युक्त ठोस MS माध्यम पर संवर्धित किया जाता है तो वे कैलस निर्माण की बजाय अनेक प्ररोह कलिकाओं का निर्माण करती हैं।
(In most of the plants of the family Solanaceae, the young leaves form numerous shoot buds instead of callus, when cultured on solid MS medium containing 1 - 5 µm kinetin or 6 - BAP or 2 - iP.)