PCR Technique and its Applications

UPDATED ON:- 01-07-2023

जीन क्लोनिंग (Gene Cloning):- आनुवंशिक अभियांत्रिकी तकनीकों की सहायता से जीन या DNA खण्ड की अनेक प्रतियाँ उत्पन्न करने की प्रक्रिया को जीन क्लोनिंग कहते हैं। यह 2 विधियों द्वारा की जा सकती है –

(Gene cloning is the process of generating multiple copies of a gene or DNA segment with the help of genetic engineering techniques. This can be done by 2 methods -)

i. RDT विधि (Recombinant DNA Technology विधि)

[RDT method (Recombinant DNA Technology method)]

ii. PCR विधि (Polymerase Chain Reaction विधि)

[PCR method (Polymerase Chain Reaction method)]

Polymerase Chain Reactions (PCR):-

•  PCR:- DNA पॉलीमरेज व DNA primers के उपयोग से DNA खण्डों के गुणन की प्रक्रिया को  PCR कहते हैं।

(The process of multiplication of DNA segments using DNA polymerase and DNA primers is called PCR.)

•  खोज (Discovery):- PCR तकनीक की खोज Kary Mullis ने 1985 में की थी।

(The PCR technique was discovered by Kary Mullis in 1985.)

•  विभिन्न तापमानों को प्राप्त करने के लिए Thermocyclers का उपयोग किया जाता है।

(Thermocyclers are used to achieve different temperatures.)

•  PCR में तीन मुख्य चरण होते हैं -

(PCR has three main steps -)

i. विकृतिकरण (Denaturation):- dsDNA को ऊष्मा देने पर 90°C तापमान पर इसकी दोनों श्रंखलायें अलग - अलग हो जाती हैं।

(When dsDNA is heated, both its chains separate at a temperature of 90°C.)

ii. Primer Annealing:- 55°C तापमान पर Primers एकल श्रंखलाओं के 5' सिरे पर जुड़ जाते हैं।

(Primers are attached at the 5 'end of single chains at a temperature of 55°C.)

iii. बहुलकीकरण (Polymerization):- 70°C तापमान पर DNA polymerase एंजाइम Primers का बहुलकीकरण कर देते हैं।

(DNA polymerase enzyme polymerize the primers at 70°C temperature.)

•  ताप स्थायी DNA पॉलीमरेज (Heat stable DNA polymerase):-

Ø सामान्य DNA पॉलीमरेज ताप संवेदी होता है। 90°C ताप पर इसका विकृतिकरण होने से यह नष्ट हो जाता है। इसलिए PCR  में हम सामान्य DNA पॉलीमरेज का उपयोग नहीं कर सकते।

(Normal DNA polymerase is heat sensitive. It is destroyed due to its deformation at 90°C temperature. Therefore, we cannot use normal DNA polymerase in PCR.)

Ø इसकी बजाय PCR में हम ताप स्थायी DNA पॉलीमरेज का उपयोग करते हैं जो उच्च ताप को सहन कर सकते हैं व इसका विकृतिकरण नहीं होता है।

(Instead, we use heat stable DNA polymerase in PCR which can tolerate high temperature and does not deform.)