Physical and Chemical methods of Gene Transfer
UPDATED ON:- 01-07-2023
प्रत्यक्ष जीन स्थानांतरण (Direct Gene Transfer):- जब बिना किसी जैविक कारक की सहायता के वांछित जीन को पादप कोशिकाओं के जीनोम में समावेशित कराके स्थायी रूपान्तरण प्राप्त किया जाता है तो इसे प्रत्यक्ष जीन स्थानांतरण कहते हैं।
(When stable transformation is achieved by incorporating the desired gene into the genome of plant cells without the help of any biological factor, it is called direct gene transfer.)
1. कणिका बंदूक विधि (Gene gun method):-
• यह जीन स्थानांतरण की एक भौतिक विधि है।
(It is a physical method of gene transfer.)
• इसे Biolistic method भी कहते हैं।
(It is also called Biolistic method.)
• इसमें 1-2µm व्यास के टंगस्टन या गोल्ड के कणों पर DNA का लेप चढ़ाकर इन्हें कणिका बंदूक के द्वारा कोशिका में दागा जाता है।
(In this, tungsten or gold particles of 1-2µm diameter are coated with DNA and fired them into the cell by a particle gun.)
• गोल्ड महंगा होता है, परंतु कोशिकाओं के लिए कम हानिकारक होता है।
(Gold is expensive, but it is less harmful to cells.)
• कणिका बंदूक की कीमत 15 लाख होती है।
(The cost of a particle gun is almost 15 lakhs.)
• कणिका बंदूक में संपीडित हीलियम गैस के द्वारा कणों को त्वरित किया जाता है।
(The particles are accelerated by compressed helium gas in the particle gun.)
• केंद्रक में पहुँचकर DNA पौधे के जीनोम में समावेशित हो जाता है।
(DNA reaches inside the nucleus and becomes incorporated into the plant's genome.)
• इस विधि से विभाज्योतक व भ्रूण में जीन स्थानांतरित किया जाता है।
(By this method, the gene is transferred to the meristem and embryo.)
2. PEG मध्यस्थ जीन स्थानांतरण (PEG mediated Gene Transfer):-
• यह जीन स्थानांतरण की एक रसायनिक विधि है।
(It is a chemical method of gene transfer.)
• इस विधि में PEG के द्वारा जीन स्थानांतरण को प्रेरित किया जाता है। (PEG = Poly Ethylene Glycol)
(In this method gene transfer is induced by PEG.)
• एक बीकर में रूपान्तरण पोष पदार्थ डालते हैं जिसमें Mg2+ आयनों की उच्च सांद्रता होती है।
(Transformation medium is added in a beaker that has a high concentration of Mg2 + ions.)
• अब पादप प्रोटोप्लास्ट को इस पोष पदार्थ में डालते हैं।
(Now plant protoplasts are put into this nutritive medium.)
• अब वांछित जीन को बीकर में डाल देते हैं।
(Now put the desired gene in the beaker.)
• अब pH को 8 तक ले जाते हैं।
(Now take the pH to 8.)
• अब 20% PEG मिलते हैं।
(Now add 20% PEG.)
• अब PEG की सांद्रता घटाते हैं और Ca2+ आयनों की सांद्रता बढ़ाते हैं।
(Now decrease the concentration of PEG and increase the concentration of Ca2+ ions.)
• अब कुछ समय के लिए ऊष्मायन देते हैं।
(Now incubate for some time.)
• DNA मिलाने से ठीक पहले पादप प्रोटोप्लास्ट को 5 मिनट तक 45°C ताप पर ऊष्मा प्रघात देने के बाद बर्फ में स्थानांतरित करने पर रूपान्तरण की आवृति 10 से 1000 गुना बढ़ जाती है।
(The transformation frequency increases 10 to 1000 times when plant protoplasts are transferred to ice after heat-shock at 45°C for 5 minutes just before adding DNA.)