Environmental requirements

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OUTLINE NOTES
Environmental requirements:-
1. Aseptic Conditions:-
·         ऊत्तक संवर्धन पूर्णतया निर्जमित परिस्थितियों में किया जाना चाहिए।
(Tissue culture should be done in completely sterilized conditions.)
·         काँच के बर्तनों को निर्जमित करने के लिए शुष्क ऊष्मा का उपयोग किया जाता है। इसके लिए ओवन का उपयोग करते हैं।
(Dry heat is used to sterilize glass wares. Oven is used for this purpose.)
·         ऑटोक्लेव में 121ºC व 15 psi दाब पर 15 मिनट के लिए संवर्धन माध्यम का गर्म वाष्प द्वारा निर्जमीकरण किया जाता है।
(The culture medium is sterilized by hot steam for 15 minutes at 121ºC and 15 psi pressure in the autoclave.)

2. Aeration:-
·         संवर्धन माध्यम में ऊत्तक का सही वायुकरण आवश्यक होता है।
(Adequate aeration of tissue is necessary in the culture medium.)

3. pH:-
·         संवर्धन माध्यम की pH 5 – 6 के मध्य होनी चाहिए।
(The pH of the culture medium should be between 5 - 6.)

4. Temperature:-
·         इंक्यूबेटर के अंदर तापमान 25 ± 2ºC होना चाहिए।
(The temperature inside the incubator should be 25 ± 2ºC.)

5. Light:-
·         पुनरुद्धभवन के लिए प्रकाशकाल व अंधकार काल दोनों की आवश्यकता होती है।
(Both the light period and the dark period are required for regeneration.)
i. प्रकाश तीव्रता = 3000 लक्स
(Light intensity = 3000 lux)
ii. प्रकाश काल = 16 घण्टे
(Light period = 16 hours)
iii. अंधकार काल = 8 घण्टे
(Dark period = 8 hours)

6. Humidity:-
·         कम आर्द्रता रखने से माध्यम का शुष्कन हो जाता है।
(Keeping the humidity low causes the medium to dry.)
·         उच्च आर्द्रता माध्यम के संदूषण के लिए उपयुक्त होती है।
(High humidity is suitable for contamination of the medium.)

7. Shaker System:- कोशिका निलंबन संवर्धन के लिए एजीटेशन व वायुकरण को बनाए रखने के लिए शेकर तंत्र का उपयोग किया जाता है। निम्न में से एक का उपयोग करते हैं:-
(The shaker system is used to maintain the agitation and aeration for cell suspension culture. One of the following is used: -)
i. Open platform orbital shaker:- ताकि प्राकृतिक प्रकाश व अंधकार काल मिल सके।
(So that natural light and darkness can be available.)
ii. Orbital incubators fitted with fluorescent lights:- ताकि कृत्रिम प्रकाश व अंधकार काल उपलब्ध कराये जा सकें।
(So that artificial light and dark period can be made available.)

8. Sub – culturing:-
·         निर्जमित परिस्थितियों में नग्न आँखों या हस्त लैंस के उपयोग से किए गए निरीक्षणों के आधार पर ऐसा प्रतीत होता है कि उनकी वृद्धि दर कम हो गई है। कर्तोतक को नए ताजा बने माध्यम में स्थानांतरित करने की आवश्यकता होती है। नए माध्यम में नई सामग्री या हार्मोन घटक कोशिका या ऊत्तक की वृद्धि अवस्था के आधार पर मिलाये जाते हैं।
(Based on observations made by the naked eye or hand lenses in sterilized conditions, they appear to have reduced their growth rate. The explant is required to be transferred to a new freshly prepared medium. In the new medium, new material or hormone components are added depending on the growth stage of the cell or tissue.)

9. Transplantation of the regenerated plant:-
·         कृत्रिम रूप से ऊत्तक से विकसित हुए पौधों को गमलों में मृदा में रोपित किया जाता है।
(Artificial grown plants from the tissue are planted in pots in the soil.)
·         गमलों में स्थानांतरित करने से पहले इन पौधों के अनुकूलन की आवश्यकता होती है।
(Aclimatization of these plants is required before transferring to pots.)

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